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Preparation and characterization of a polyclonal antibody from rabbit for detection of trinitrotoluene by a surface plasmon resonance biosensor.

表面プラスモン共鳴音バイオセンサーでのトリニトロトルエンの検出のためのウサギからのポリクローナル抗体の準備と特徴描写。

Published date

2005-09-21

Author

Kiyoshi Matsumoto, Akira Torimaru, Sachiko Ishitobi, Takatoshi Sakai, Hiroya Ishikawa, Kiyoshi Toko, Norio Miura, Toshihiko Imato

Affiliation

Graduate School of Agriculture, Kyushu University, Fukuoka 812-8581, Japan.

Abstract

A polyclonal antibody against trinitrophenyl (TNP) derivatives was raised in rabbit, and the antibody was applied to detection of trinitrotoluene (TNT) using a surface plasmon resonance (SPR) biosensor. TNP-keyhole limpet hemocyanine (TNP-KLH) conjugate was injected into a rabbit, and a polyclonal anti-TNP antibody was realized after purification of the sera using protein G. Aspects of the anti-TNP antibody against various nitroaromatic compounds, such as cross-reactivities and affinities, were characterized. The temperature dependence of the affinity between the anti-TNP antibody and TNT was also evaluated. The quantification of TNT was based on the principle of indirect competitive immunoassay, in which the immunoreaction between the TNP-beta-alanine-ovalbumin (TNP-beta-ala-OVA) and anti-TNP antibody was inhibited in the presence of free TNT in solution. TNP-beta-ala-OVA was immobilized to the dextran matrix on the Au surface by amine coupling. The addition of a mixture of free TNT to the anti-TNP antibody was found to decrease the incidence angle shift due to the inhibitory effect of TNT. The immunoassay exhibited excellent sensitivity for the detection of TNT in the concentration range of 3x10(-11) to 3x10(-7)g/ml. To increase the sensitivity of the sensor, anti-rabbit IgG antibody was used. After flowing the mixture of free TNT and anti-TNP antibody, anti-rabbit IgG antibody was injected, and the incidence angle shift was measured. Amplification of the signal was observed and the detection limit was improved to 1x10(-11)g/ml.

 

トリニトロフェニル(TNP)誘導体に対するポリクローナル抗体はウサギで上がった、そして、抗体は表面プラスモン共鳴音(SPR)バイオセンサーを使用しているトリニトロトルエン(TNT)の検出に適用された。
TNP-鍵穴カサガイ血シアニン(TNP-KLH)抱合体はウサギに注射された、そして、さまざまな芳香族ニトロ化合物合成物(例えば交差反応性と類似性)に対して抗TNP抗体のタンパク質G.側面を使用している血清の精製が特徴づけられたあと、多クローン性抗TNP抗体は理解された。
抗TNP抗体とTNTの間の類似性の温度依存も、評価された。
TNTの定量化は間接的な競争イムノアッセイの原則に基づいた。
そこにおいて、TNP-βアラニン-オボアルブミン(TNP-β-翼-OVA)と抗TNP抗体の間の免疫反応は溶液で遊離TNTの面前で阻害された。
TNP-β-翼-OVAは、アミン結合によってAu面でデキストラン母体に固定された。
抗TNP抗体に対する遊離TNTの混合物の追加が、TNTの抑制効果のため発生率角度推移を減少させるとわかった。
イムノアッセイは、3x10(-7)g/mlに、3x10(-11)の集中範囲で、TNTの検出のために、優れた感度を示した。
センサーの感度を増加させるために、抗ウサギIgG抗体が使われた。
遊離TNTと抗TNP抗体を混ぜたものを流した後に、抗ウサギIgG抗体は注射された、そして、発生率角度推移は測定された。
信号の増幅は観察された、そして、検出限界は1x10(-11)g/mlに改善された。


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