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Significant increases in potato Starch-Synthase and Starch-Branching-Enzyme activities by dilution with buffer containing dithiothreitol and polyvinyl alcohol 50 K.

ジャガイモでんぷん合成酵素の有意の増加とバッファを含むジチオスレイトールとポリビニルアルコール50Kによる希釈による澱粉-分岐形成-酵素活性。

Published date

2012-12-07

Author

Rupendra Mukerjea, Alexander N Gray, John F Robyt

Affiliation

Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Enzymology, The Roy J. Carver Department of Biochemistry, Biophysics, and Molecular Biology, Iowa State University, Ames, IA 50011, USA.

Abstract

We have recently found that the dilution of purified potato Starch-Synthases (SS) and Starch-Branching-Enzymes (SBEs), by a glycine buffer (pH 8.5), containing 1.0mM dithiothreitol (DTT) and 0.04% (w/v) polyvinyl alcohol (PVA) 50K, produced a striking and significant increase in activity (mIU/mL and total mIU) when diluted 1→2 to 1→10. As an example, one SS fraction diluted 1→10 went from 259 to 1470 mIU/mL, giving a total of 14,700 mIU. Dilutions of 1→15 usually resulted in a complete loss of activity. Removal of both DTT and PVA also gave the complete loss of activity. Individual removal of just DTT and the removal of just PVA also produced lowered activities on dilution. The addition of the DTT and the PVA back to the diluted fractions did produce an increase in the activity, but never to the extent that occurred when the samples were diluted simultaneously with both DTT and PVA together in the diluting buffer. Dilution of SBE with buffer containing both DTT and PVA, gave moderate increases, with the exception of one fraction that diluted 1→20 gave a significant increase from 18 to 382 mIU/mL and a total of 7640 mIU. It is concluded that there are inactive starch synthesizing enzymes in the purified fractions that are significantly activated by DTT and PVA, giving much greater amounts of enzyme activities.

 

精製されたジャガイモでんぷん合成酵素(SS)の希釈剤と澱粉-分岐形成-酵素(SBE)が、グリシン・バッファ(pH 8.5)によって、1.0mMのジチオスレイトール(DTT)と0.04%(w/v)のポリビニルアルコール(PVA)50Kを含んで活性(mIU/mL、そして、総量mIU)の著しいおよび有意の増加を生じたと、我々は最近わかったいつの希釈された1→2~1→10。
例えば、1 SS分数は10が259~1470mIU/mL行った1→を希釈した。
そして、合計14,700mIUを与えた。
1→15の希釈剤は、通常活性の完全な喪失に帰着した。
DTTとPVAの除去も、活性の完全な喪失をした。
ちょうどDTTの個々の除去とちょうど生じるPVAの除去も、希釈に関して活動を降ろした。
DTTの追加と希釈された分数へのPVAは、決して検体が希釈緩衝装置で一緒にDTTとPVAと同時に希釈されたとき、起こった範囲にでなく、活性で増加を生じた。
希釈された1→20が18から382mIU/mLと合計7640mIUまで有意の増加に与えた1分数を除いては、DTTとPVAを含んでいるバッファによるSBEを薄めることは、中等度の増加を与えた。
不活性澱粉合成酵素がDTTとPVAによって有意に活性化される精製画分にあると結論される。
そして、非常により大きな量の酵素活性を与える。


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